蛋白質保存方法你知多少

　　蛋白質的保存是一個比較棘手的問題，分子生物學實驗室的童鞋們或多或少都會碰到。
 

　　有沒有遇到過，不同批次純化的蛋白，采用同樣的測試方法，活性卻不太一樣？
 

　　有沒有遇到過新純化的蛋白，從冰箱拿出融化后，居然沉淀了？
 

　　蛋白質純化后，保存方式都有哪些呢？
 

　　一、謹記蛋白質的保存原則
 

　　低溫、分裝、濃縮、速凍/速融、添加劑
 

　　二、保存方法你知多少
 

　　蛋白質的的保存方法的選擇取決于蛋白質的穩(wěn)定性以及保存后什么時候再次使用你的蛋白。
 

　　1、如即提即用的話，可將濃縮蛋白質儲存在單一溶液(如PBS)，置于聚丙烯管或干凈的玻璃容器中，放在4°C冰箱保存。
 

　　優(yōu)點：蛋白容易獲得，可以快速進行實驗，且同一管樣品可重復取樣，這樣避免了因經常解凍而加速蛋白的降解。
 

　　缺點：可能會面臨微生物污染，蛋白質失活和氧化，可能對實驗數據的均一性造成影響。要避免這種情況，可以把蛋白質分成小份儲存，并加入蛋白酶抑制劑、抗菌劑和還原劑等。但也要根據自己蛋白的情況，如果你的蛋白是完整的膜蛋白或分泌蛋白,很可能分子內存在二硫鍵，為保證其完整性，應該存儲在氧化環(huán)境中。另外，儲存時間超過一個月的蛋白可以考慮扔掉。
 

　　2、透析到合適的緩沖液中可以凍干，放4°保存；也可加高濃度的硫酸銨(你的蛋白不沉淀的話)，4°保存。
 

　　注意：你要注意加入硫酸銨后pH會下降一些，你的緩沖液可不能太接近蛋白的等電點啊，蛋白在等電點附近沉淀很多時候是不可復溶，即使復溶活性也不能保證。
 

　　3、純化后的蛋白測濃度后，加入50%甘油，確認混勻后分裝，液氮速凍，放入-20度或-80度保存，尤其適用于酶類。
 

　　優(yōu)點：在低溫下，蛋白質對微生物污染，蛋白酶降解和氧化反應更有抵抗力，容易保證其活性。用甘油或乙二醇稀釋使蛋白處于溶液中，可以方便取樣。此外，這種方式儲存的蛋白質可以保存長達一年，對于抗體軛合物是一個好的選擇。
 

　　缺點： 蛋白質在-20°溶液中仍有可能遭受水解、污染和氧化，如果蛋白對還原性環(huán)境要求比較高，也需加入抑制劑、還原劑等。而且將樣品存放在50%冷凍保護劑中有時是不可取的，取決于你接下來要做的實驗。
 

　　4、有些蛋白可以不加甘油，直接液氮速凍幾分鐘，-80度保存。
 

　　優(yōu)點：可以長期保存(多年)，不需要甘油、*等化學物質，避免蛋白質降解或微生物污染。
 

　　缺點：冷凍蛋白質應一次性使用，為了避免反復凍融發(fā)生降解。此外,抗體軛合物(特別是堿性磷酸酶復合物)冷凍后可能會失活。
 

　　5、長期保存蛋白質的另一個方式是凍干(lyophilization)。
 

　　優(yōu)點：蛋白質凍干后會呈現蓬松的白色粉末形式，處于脫水的狀態(tài)，可以在冰箱中無限期保存。
 

　　缺點：對于某些蛋白質，凍干操作有一個潛在問題就是蛋白質不能復溶。凍干/復溶的過程同樣會對蛋白質產生一定的傷害作用。
 

　　三、這些重點你要知道
 

　　1、保證恒定的pH值，一般PBS最為常用；
 

　　2、保證一定的蛋白濃度，如果濃度比較稀的話，可以考慮添加一定量的BSA；
 

　　3、甘油的添加也能在很大程度上提高抗體的穩(wěn)定性；
 

　　4. 為了防腐可以添加一定量的*(辣根過氧化物酶偶聯(lián)的二抗一般不能加)，如果樣品要用于生物學檢測，避免使用防腐劑。
 

　　5、無論是冷凍還是儲存在溶液中，將蛋白進行分裝，以避免凍融，降低污染的風險。
 

　　6、進行蛋白質操作實驗時一定要帶手套，們的皮膚上有一些蛋白酶，這些蛋白酶很可能會降解掉我們的蛋白樣品。皮膚上的其他化學分子也可能會污染蛋白樣品。另外，為了防止細菌的生長，蛋白質最好保存在滅菌的小管中。
 

　　7、避免反復凍融或凍干重溶解過程，這樣很可能會降低生物活性。
 

　　8、避免震蕩，震蕩產生的剪切力有可能會對蛋白質產生破壞作用。震蕩時溶液中會產生氣泡，氧氣的進入會導致蛋白質處在氧化環(huán)境中。蛋白質中含有半胱氨酸，其極易被氧化為胱氨酸，這一過程很可能會破環(huán)蛋白質的活性。