細胞從培養(yǎng)皿上的解離

　　以下通用步驟可以在保持細胞完整性的同時從培養(yǎng)器皿中分離多種細胞系。但這一步驟不能廣泛適用于所有細胞系。應通過實驗來確定不同體系所需的佳條件和濃度。
 

　　?在傳代培養(yǎng)時監(jiān)測細胞存活率。
 

　　?細胞存活率應大于90%。
 

　　?對于無血清培養(yǎng)基，建議降低胰酶用量。
 

　　1.去除器皿中原有細胞培養(yǎng)基。
 

　　2.用不含鈣鎂的平衡鹽溶液或EDTA清洗細胞。將清洗溶液加到培養(yǎng)瓶中與細胞相對的一側。搖動培養(yǎng)瓶1-2分鐘以沖洗細胞層，然后倒掉清洗溶液。
 

　　3.在培養(yǎng)瓶中與細胞相對的一側以2-3ml/25cm2的比例加入選定的解離溶液(見下表)。確保解離溶液能夠覆蓋整個細胞層。在37℃下孵育培養(yǎng)瓶。并輕輕搖動。通常細胞在5-15分鐘內解離。不同細胞系的解離時間有所不同。仔細觀測解離過程，以免損傷細胞。對于難從基質上解離下來的細胞系，可以輕敲培養(yǎng)瓶以加快解離過程。
 

　　4.當細胞解離時，豎直放置培養(yǎng)瓶使細胞流向培養(yǎng)瓶底部。向培養(yǎng)瓶中加入培養(yǎng)基。反復吹吸單層表面以分散細胞。計算細胞個數(shù)，然后傳代培養(yǎng)細胞。
 

　　注意：如果使用無血清培養(yǎng)基，應加入大豆胰酶抑制劑。對于0.25mg/ml的胰酶抑制劑，一般按1：1(體積比)的比例加入即可抑制胰酶。細胞